Autoklaf merupakan instrumen vital dalam berbagai sektor, mulai dari laboratorium medis, mikrobiologi, hingga industri farmasi. Fungsi utamanya adalah sterilisasi menggunakan kombinasi suhu tinggi dan tekanan pada autoklaf. Tekanan ini bukan sekadar tambahan, melainkan komponen krusial yang memungkinkan air mencapai titik didih jauh di atas 100°C pada tekanan atmosfer standar, sehingga menjamin eliminasi mikroorganisme, termasuk spora yang paling resisten sekalipun.
Pemahaman mendalam mengenai bagaimana tekanan bekerja dan diatur dalam autoklaf sangat penting untuk memastikan efektivitas sterilisasi sekaligus menjaga keamanan operasional peralatan. Kesalahan dalam mengatur tekanan dapat mengakibatkan kegagalan sterilisasi (jika tekanan terlalu rendah) atau kerusakan pada peralatan dan material yang disterilkan (jika tekanan terlalu tinggi).
Secara fundamental, autoklaf bekerja berdasarkan prinsip bahwa peningkatan tekanan akan meningkatkan titik didih air. Pada tekanan atmosfer normal (sekitar 1 bar), air mendidih pada 100°C. Namun, dalam autoklaf, tekanan dijaga konstan, biasanya antara 15 hingga 30 psi (pound per square inch) di atas tekanan atmosfer.
Pada tekanan 15 psi di atas atmosfer, suhu yang dicapai adalah sekitar 121°C. Suhu 121°C selama 15 hingga 20 menit sering kali menjadi standar emas sterilisasi untuk sebagian besar media kultur dan peralatan laboratorium. Jika tekanan dilepaskan terlalu cepat, suhu akan turun drastis, yang dapat menyebabkan fenomena seperti flash boiling (mendidih seketika) pada cairan dalam wadah tertutup, berpotensi memicu ledakan kecil atau merusak sampel.
Tekanan dalam autoklaf bekerja secara sinergis dengan suhu dan waktu. Efektivitas ketiganya saling bergantung:
Autoklaf modern memiliki sistem kontrol otomatis untuk mengatur laju peningkatan dan penurunan tekanan. Namun, operator harus memahami prosedur pelepasan tekanan:
Kegagalan dalam menjaga atau mengontrol tekanan pada autoklaf memiliki dua risiko utama:
Pertama, jika tekanan tidak mencapai level yang ditentukan, suhu tidak akan mencapai titik sterilisasi optimal (misalnya 121°C). Ini menyebabkan kegagalan sterilisasi, di mana mikroorganisme patogen mungkin selamat, menimbulkan risiko kontaminasi silang atau infeksi.
Kedua, pelepasan tekanan yang terlalu cepat setelah siklus selesai dapat menyebabkan superheating pada cairan. Cairan yang telah dipanaskan melebihi titik didihnya tanpa mendidih (karena terkurung oleh tekanan) akan mendidih secara eksplosif saat tekanan dilepaskan. Hal ini merupakan bahaya keselamatan kerja yang serius bagi operator.
Oleh karena itu, verifikasi rutin terhadap sensor tekanan, katup pelepas, dan sistem vakum adalah wajib. Indikator biologi (spore test) harus selalu dijalankan untuk mengonfirmasi bahwa kombinasi suhu, waktu, dan tekanan yang diterapkan berhasil membunuh semua mikroorganisme.